In-Cell DEER Spectroscopy of Nanodisc-Delivered Membrane Proteins in Living Cell Membranes

Chu-Chun Cheng, Ruei-Fong Tsai, Che-Kai Lin, Kui-Thong Tan, Vidmantas Kalendra,
Mantas Simenas, Chun-Wei Lin, and Yun-Wei Chiang
JACS Au 2024, 4, 10, 3766–3770

國立清華大學 化學系 林竣偉助理教授
國立清華大學 化學系 江昀緯教授

膜蛋白在許多細胞生理程序中扮演關鍵角色,例如運輸分子和傳遞信號。然而,要在其自然環境中研究這些蛋白質的結構變化和功能,仍然具有很大的挑戰性。在我們的研究中,我們開發了一種新方法,使用稱為奈米碟的人工膜片,將標記的膜蛋白輸送進入活細胞的膜中。透過這項技術,我們可以直接使用雙電子自旋共振(DEER)光譜法來觀察蛋白質在活細胞上的結構變化。我們將這個方法應用於膜蛋白 BsYetJ,並成功將其輸送至兩種不同的細菌中:大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)和枯草桿菌(革蘭氏陽性菌)。結果顯示,輸送後的 BsYetJ 仍保有運輸鈣離子的功能,顯示其在轉移過程中仍保持活性。我們的實驗還發現,BsYetJ 在不同膜環境中的行為有所不同,顯示出周圍脂質對蛋白質功能的影響。這種奈米碟輸送方法克服了傳統技術的限制,使研究膜蛋白在真實生理條件中的結構和功能變得更加容易,可輕易的將修飾過、改造過的膜蛋白輸送至活細胞,為未來研究提供了一個有價值的工具。

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